Print Version
   Close

URL: http://www.mycotoxins.info/ru/analiz/?tx_cookiepolicybar_pi1%5Baction%5D=close&tx_cookiepolicybar_pi1%5Bcontroller%5D=CookieBar&cHash=d8b10d4d24ace725a04edbba86129be2

Анализ на микотоксины

Для анализа на микотоксины в пищевых продуктах и корме используются разнообразные методы тестирования. Эти методы варьируют от простых в проведении экспресс-тестов до тестов, выполняемых по стандартным методикам, для которых требуется больше времени, но они дают более подробные результаты. Получаемые результаты могут носить качественный, полуколичественный или количественный характер.

Таблица 1. Экспресс-анализ – Стандартное тестирование
Экспресс-анализСтандартное тестирование
ИХА на тест-полоскахТонкослойная хроматография (ТСХ)
Твердофазный иммунофлюоресцентный анализ (ИФА)Газовая хроматография
ФлюорометрияВысокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
Жидкостная хроматография – Масс-спектрометрия (ЖХ/МС)
supported by Romer Labs
RomerLabs

Общая методика проведения анализа включает пять основных этапов:

5 main steps
5 main steps

Отбор проб – сложная процедура, что обусловлено гетерогенным распределением микотоксинов в пробах


Измельчение
– мельницы, специально предназначенные для измельчения проб


Экстракция
– различные буферы для экстракции, в зависимости от вида микотоксина и метода анализа


Очистка
– колонки заполняют смесями адсорбентов, примеси прилипают к упаковочному материалу, микотоксины проходят в неизменном виде (если используются иммуноафинные колонки, колонки содержат антитела, связывающие токсин, и примеси проходят через колонку)

Анализ

ИХА на тест-полосках

  • одностадийный иммунохроматографический анализ на тест-полосках
  • основан на конкурентном формате иммуноферментного анализа
  • тест-полоска обычно включает подложку для пробы, подложку под конъюгат с золотом, мембрану, адсорбирующую подложку и адгезивную подложку

Порядок проведения:

  • комплекс антитело-частица (конъюгат) смешивается с экстрактом пробы в микролунке
  • полоска помещается в лунку
  • смешанное содержимое продвигается к мембране, содержащей зону теста и зону контроля
  • зона теста захватывает свободный конъюгат и отображает видимую полоску
  • интенсивность линии обратно пропорциональна концентрации микотоксина в пробе
  • линия контроля всегда видна, вне зависимости от содержания микотоксина в пробе
Таблица 2. ИХА на тест-полосках – за и против
ЗаПротив
Экспресс-анализ (3-5 минут)интерференции матрицы
Специализированного оборудования не требуется
Количественные результаты могут быть получены с использованием устройства для ИХА на тест-полосках
Lateral Flow Test - Procedure
Lateral Flow Test - Procedure

Твердофазный иммунофлюоресцентный анализ (ИФА)

AgraQuant_Elisa-Plate
AgraQuant_Elisa-Plate
  • один из наиболее распространенных иммунологических методов, используемых в тест-наборах для анализа микотоксинов в пищевых продуктах и кормах
  • наиболее часто используется прямой конкурентный ИФА

Порядок проведения

  1. известное количество меченых токсинов конкурирует с любым возможным токсином в пробе за специфические антитела, прикрепленные к поверхности реакционной емкости
  2. несвязанный токсин вымывается из емкости; меченый ферментом токсин остается в емкости
  3. реакция с субстратом за фермент
  4. добавление стоп-раствора; получаемый цветной продукт измеряется оптическим путем
Competitive ELISA
Competitive ELISA
  • качественные результаты только при визуальной оценке
  • количественные результаты через 10-20 минут при использовании ридера
  • идеально для проверки продуктов на соответствие с допустимыми уровнями, определенными в ЕС
Таблица 3. Таблица 3. ИФА - За и против
ЗаПротив
простая экстракция проб интерференции матрицы
не требуется этап очисткитолько для валидированных матриц (в основном сырьевые продукты)
высокочувствительныйперекрестная реакция антител

Флюорометрия

  • измеряет флюоресценцию с использованием флюорометра
  • качественные результаты
  • оптимально использовать при необходимости тестирования отдельных проб в течение короткого периода времени, например, при тестировании поступающих партий в период уборки культур
Таблица 4. Флюорометрия – за и против
ЗаПротив
быстро – менее пяти минут
только для определения общего содержания афлатоксинов

очень надежный метод
может быть использован персоналом без специальной подготовки
не требуется лаборатория
Флюорометрия

Тонкослойная хроматография (ТСХ)

  • пластинка покрыта адсорбирующей матрицей, такой как силикагель (стационарная фаза)
  • система растворителя, содержащая пробу (мобильная фаза), мигрирует через матрицу в направлении верха пластинки
  • соединения разделяются на основе взаимодействий между мобильной и стационарной фазами
  • пятна видны в ультрафиолетовом свете
  • стандартные пробы для сравнения наносят таким же образом в разных концентрациях
  • оценка концентрации пробы методом интерполяции
Таблица 5. ТСХ – за и против
ЗаПротив
простой, дешевый, быстрый методразделение может быть неудовлетворительным
одновременно можно исследовать партию проб невысокая точность
нечувствителен к некоторым токсинам

Газовая хроматография

Газовая хроматография

Определенные соединения введенной пробы разделяются с помощью газа (мобильной фазы), проходящего через нагретую стеклянную колонку, покрытую стационарной нелетучей жидкостью (стационарная фаза). Разделенные аналиты, выходящие из колонки, определяются с помощью химических или физических систем детектирования.

Таблица 6. Газовая хроматография – за и против
ЗаПротив
чувствительный дериватизация требует много времени и подвержена ошибкам
низкая вариативностьиспользуется реже

Высокоэффективная Жидкостная Хроматография (ВЭЖХ)

Высокоэффективная Жидкостная Хроматография (ВЭЖХ)
Высокоэффективная Жидкостная Хроматография (ВЭЖХ)
  • небольшое количество пробы вводится в поток растворителя (мобильная фаза)
  • прокачивается через колонку с адсорбирующей матрицей (стационарная фаза)
  • компоненты разделяются на основе взаимодействий между стационарной и подвижной фазами
  • затем компоненты элюируют из матрицы • результаты, полученные детектором, сравнивают с соответствующими концентрациями стандартов
  • разнообразие детекторов: спектрофотометрические детекторы (УФ-Вид, диодно-матричный), рефрактометры (КП), флюоресцентные детекторы (ФЛД), электрохимические детекторы, детекторы радиоактивности и масс-спектрометры (МС)
  • наиболее часто используется с системами ВЭЖХ-УФ или -ФЛД и МС/МС
Таблица 7. ВЭЖХ – за и против
ЗаПротив
чувствительный
требуется только небольшое количество пробытребует много времени
применим для сложных матрицсоединения должны иметь способность к поглощению УФ-света или флюоресценции, или должна быть проведена дериватизация
минимальная вариативность
высокая точность

Жидкостная хроматография – Масс-спектрометрия (ЖХ/МС)

  • жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектрометрией (ЖХ/МС) или тандемной масс-спектрометрией (ЖХ/МС/МС)
  • стандартный метод выбора в лабораториях
  • масс-спектрометрия – как детектор для жидкостной хроматографии (например, ВЭЖХ) • анализ на многие токсины: может определять одновременно все контролируемые микотоксины
  • эффективный инструмент для анализа очень сложных смесей
Таблица 8. ЖХ/МС – За и против
ЗаПротив
низкие пределы обнаружениязатратный метод
качественные результатытребуется специально обученный персонал
способность производить структурированную информацию требует много времени в сравнении с экспресс-методами
минимальная обработка проб
может работать с широким спектром аналитов с разной полярностью
применим для сложных матриц
Масс-спектрометрия
Масс-спектрометрия
При поддержке Romer Labs
Romer Labs



BIOMIN Holding GmbH, Erber Campus 1, 3131 Getzersdorf, Austria
Tel.: +43 2782 803 0, office@biomin.net